一、背景

自上世紀80年代，乙肝被確認在我國高度流行及相應產(chǎn)生的沉重疾病負擔，讓乙肝防控成為我國戰(zhàn)略性衛(wèi)生事業(yè)之一。之后，乙肝疫苗的預防接種、臨床乙肝檢測試劑的不斷進步、乙肝治療性藥物的推陳出新，使乙肝傳播得到有效的控制。

二、關(guān)于HBV隱匿感染

然而，伴隨各種有效措施的同時，隨之而來的野生株選擇壓力之下，乙肝的突變株逐漸增多：

“1978年，Hoofnagle首次報道了一起HBsAg(-) /HBcAb(+)的血液導致的受血者HBV感染”

“1991年， Brechot用HBsAg(-)/DNA(+)的血漿接種大猩猩，觀察到急性乙肝的發(fā)生”

“1996年后，在獻血員和非甲-戊型肝炎患者中有越來越多的隱匿性HBV感染報道”

隱匿性HBV感染指的是當前主流HBsAg試劑檢測陰性但肝組織（或血清）HBV DNA陽性的感染狀態(tài)。HBsAg “a”表位突變是造成隱匿感染的重要原因。一份研究數(shù)據(jù)表明：普通人群HBsAg陽性攜帶者中的發(fā)生可能影響HBsAg抗原性的a表位變異發(fā)生頻率約為：15.7% （95%CI：11.9~20.2%)（見下圖一）；

HBsAg陰性攜帶者（OBI）獻血者（HBcAb陽性) 中的發(fā)生可能影響HBsAg抗原性的a表位變異發(fā)生頻率約為：36.7% （11/30) （見下圖二）。

a表位指的是乙肝表面抗原上124-147間的氨基酸組成，該片段可高頻率變異。

三、原料開發(fā)

為解決由此造成的隱匿性HBV感染問題，廈門市同仁心（TRX）及合作的科研團隊開展持續(xù)研究，成功開發(fā)了抗體組合包被方案，有效解決a表位突變造成的漏檢問題。

首先，研發(fā)團隊通過多種途徑，選取天然病毒/重組病毒/野生病毒/變異病毒等不同種類的代表抗原作為免疫原，免疫老鼠后，獲得活性備選抗體350余株;

然后，在獲得備選抗體中，開展基因圖譜分析，在不同的結(jié)構(gòu)及位點，共選擇30株建盤；

最后，通過大量篩選實驗，得到5株候選單抗：

? 6C10 （針對 1^st loop 線性單抗）

? SF（針對  a表位構(gòu)象單抗）

? 42B6 （針對 2^nd loop 線性單抗）

? 2C1（針對 1^st loop 構(gòu)象單抗）

? 15D1 （針對 1^st loop 構(gòu)象單抗）

5株單抗采用Octet Red System進行親和力測定，KD 值均在1 ×10^-10 以上。

四、試劑評估

將6C10、42B6、2C1、15D1、SF五株單抗組合包被，GP-sAg作為標記的雙抗體夾心法為基礎(chǔ)，配制化學發(fā)光試劑，開展性能評估：

• HBsAg分析靈敏度：基于WHO標準品進行分析靈敏度測試，s/co值如下，TRX的靈敏度最高；

• HBsAg轉(zhuǎn)換盤檢測靈敏度:TRX， Roche Elecsys，Abbott i2000三種HBsAg試劑檢測窗口期基本一致；

• HBsAg變異株檢測性能：收集臨床病人中不同的基因型、血清型及突變株血清標本，在不同試劑體系平行檢測，結(jié)果TRX的檢出率明顯優(yōu)于市場主流檢測試劑；

• HBsAg與雅培i2000定性檢測的符合率：TRX與Abbott i2000系統(tǒng)對臨床標本的定性檢測結(jié)果的一致性高。